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1、實實 驗驗 細菌的染色和細菌細胞細菌的染色和細菌細胞構造的察看構造的察看 細菌的染色和細菌細胞構造的察看 目的要求目的要求 染色劑和染色的原理染色劑和染色的原理 實驗資料實驗資料 實驗程序實驗程序 思索題思索題目的要求目的要求 學習微生物涂片學習微生物涂片 掌握細菌的普通染色發和革蘭氏染色掌握細菌的普通染色發和革蘭氏染色 進一步熟練掌握顯微鏡油鏡的運用技術進一步熟練掌握顯微鏡油鏡的運用技術 察看和識別細菌細胞的特殊構造察看和識別細菌細胞的特殊構造染色劑和染色原理染色劑和染色原理 微生物染色的根本原理，是借助物理和化學要素的作用而進展的。微生物染色的根本原理，是借助物理和化學要素的作用而進展的。
2、物理要素如：細胞及細胞物質對染料的毛細景象、浸透、吸附作物理要素如：細胞及細胞物質對染料的毛細景象、浸透、吸附作用等。用等?；瘜W要素如：正負離子之間的相互吸引等化學要素如：正負離子之間的相互吸引等 染色劑染色劑 染料按其電離后所帶電荷的性質可分為以下類型：染料按其電離后所帶電荷的性質可分為以下類型：1.酸性染料：如酸性復紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。酸性染料：如酸性復紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。2.堿性染料：普通有堿性復紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結晶堿性染料：普通有堿性復紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結晶紫、美蘭、甲基紫等，細菌易被堿性染料染色。紫、美蘭、甲基紫等，細菌易被堿性染料染色。
3、3.中性復合染料：如伊紅、美蘭等，中性復合染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和染料和Gimsa染染料等常用于細胞核染色。料等常用于細胞核染色。4.單純染色：這類染料的化學親和力低，大多是偶氮化合物，單純染色：這類染料的化學親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類Sudan b)的染料。的染料。染色劑和染色原理染色劑和染色原理微生物染色常用染料如下表：微生物染色常用染料如下表：實驗資料實驗資料 涂片染色用的細菌培育物涂片染色用的細菌培育物 .大腸桿菌大腸桿菌Escherichia coli)24h的斜面培育物。的斜面培育物。.枯草桿
4、菌枯草桿菌Bacillus subtilis)1216h的斜面培育的斜面培育物。物。載玻片、接種環、鑷子、酒精燈、各種染色液、火柴、載玻片、接種環、鑷子、酒精燈、各種染色液、火柴、無菌牙簽、玻璃鉛筆、蒸餾水。無菌牙簽、玻璃鉛筆、蒸餾水。顯微鏡、鏡頭油、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯等。顯微鏡、鏡頭油、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯等。示范片示范片 .蘇云金芽孢桿菌蘇云金芽孢桿菌Bacillus thuringiensis的芽孢；的芽孢；.膠質芽孢桿菌膠質芽孢桿菌Bacillus mucillaginosus的莢膜；的莢膜；.枯草芽孢桿菌的鞭毛?？莶菅挎邨U菌的鞭毛。實驗程序實驗程序 細菌染色的方法和細菌染色的方
5、法和步驟步驟 細菌染色的方法細菌染色的方法:.單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以察看單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以察看微生物的大小、外形、和細胞陳列情況，但不能鑒微生物的大小、外形、和細胞陳列情況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構造等。別微生物以及它的特殊構造等。.復染色法：用兩種或兩種以上染色液進展染色，復染色法：用兩種或兩種以上染色液進展染色，有協助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常有協助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、細胞染色法等。芽孢染色法、鞭毛染色法
6、、細胞染色法等。染色技術的普經過程染色技術的普經過程 涂片涂片枯燥固定染色媒染脫色復染枯燥固定染色媒染脫色復染水洗枯燥鏡檢水洗枯燥鏡檢實驗程序實驗程序 簡單染色的方法和步簡單染色的方法和步驟驟 簡單染色法普通染色法簡單染色法普通染色法 .菌種：牙垢細菌菌種：牙垢細菌 .涂片涂片 .枯燥：自然氣干或酒精燈枯燥：自然氣干或酒精燈高處悄然加熱。高處悄然加熱。固定固定 .染色：在整個涂面上滴加染色：在整個涂面上滴加齊氏石炭酸復紅，染色分齊氏石炭酸復紅，染色分鐘鐘。.水洗：傾去染液，用自來水洗：傾去染液，用自來水細流沖洗至流下的水中無水細流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。染料顏色為止?？菰铮嚎諝庵凶匀豢?/p>
7、燥?？菰铮嚎諝庵凶匀豢菰?。鏡檢：在油鏡下察看牙垢鏡檢：在油鏡下察看牙垢中的各種細菌形狀并繪圖。中的各種細菌形狀并繪圖。實驗程序實驗程序 革蘭氏染色的方法革蘭氏染色的方法和步驟和步驟 革蘭氏革蘭氏Gram染色法染色法 1.涂片涂片 2.初染：在做好的涂面上滴加初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結晶紫染液，染草酸銨結晶紫染液，染1分鐘，分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面面1分鐘，后水洗。分鐘，后水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進展脫色約酒
8、精進展脫色約30秒，后秒，后立刻用流水沖洗。立刻用流水沖洗。5.復染：滴加番紅染色液，染復染：滴加番紅染色液，染1分鐘，水洗后用吸水紙吸干。分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：察看染色結果并繪圖。鏡檢：察看染色結果并繪圖。實驗程序實驗程序 莢膜染色的方法和莢膜染色的方法和步驟步驟 莢膜染色法示范：莢膜薄，易變形，莢膜染色法示范：莢膜薄，易變形，因此在涂片過程中不能用加熱固定。因此在涂片過程中不能用加熱固定。1.取斜面培育取斜面培育72h左右的膠質芽孢桿菌涂左右的膠質芽孢桿菌涂片，自然枯燥，自然固定。片，自然枯燥，自然固定。2.染色：在已自然晾干的涂面上，滴加染色：在已自然晾干的涂面上，滴加1%
9、結晶紫染色液染色結晶紫染色液染色2min，以，以20%硫酸硫酸銅沖洗數次，再用自來水沖洗銅沖洗數次，再用自來水沖洗1次，晾干。次，晾干。3.鏡檢：油鏡察看示范片并繪圖菌體鏡檢：油鏡察看示范片并繪圖菌體紅色，莢膜無色。紅色，莢膜無色。實驗程序實驗程序 鞭毛染色的方法和鞭毛染色的方法和步驟步驟 菌液的制備及涂片：菌種應預先延續傳代菌液的制備及涂片：菌種應預先延續傳代56代。代。1.接種：先在斜面底部參與接種：先在斜面底部參與0.51mL無菌水，取活化的枯草無菌水，取活化的枯草桿菌桿菌12環菌苔，接種于無菌水中，環菌苔，接種于無菌水中，300C 培育培育1518h。2.制備菌液：挑取斜面底部近水面處
10、菌苔數環，移入制備菌液：挑取斜面底部近水面處菌苔數環，移入1mL與與菌種同溫的無菌水中，在菌種同溫的無菌水中，在280C溫箱中保溫溫箱中保溫10min。3.鞭毛涂片：先用懸滴法察看其運動性，假設運動性很強，鞭毛涂片：先用懸滴法察看其運動性，假設運動性很強，即可涂片。涂片后自然枯燥、固定。即可涂片。涂片后自然枯燥、固定。染色：染色液必需新配制，涂片必需充分晾干才干染色。染色：染色液必需新配制，涂片必需充分晾干才干染色。1.先用剛過濾的鞭毛染色液先用剛過濾的鞭毛染色液A染染7.58min左右。左右。2.傾去傾去A液，再加鞭毛染色液液，再加鞭毛染色液B液染液染35min，水洗，自然枯，水洗，自然枯燥。燥。.用液石炭酸復紅復染用液石炭酸復紅復染min，水洗、晾干、鏡檢。，水洗、晾干、鏡檢。油鏡下察看鞭毛的數目及著生情況示范鏡并繪圖油鏡下察看鞭毛的數目及著生情況示范鏡并繪圖 菌體與鞭毛都呈紅色，周生鞭毛。菌體與鞭毛都呈紅色，周生鞭毛。錄 像 演 示錄 像 演 示思考題思考題 簡單染色法中各步驟的本卷須知是什么？簡單染色法中各步驟的本卷須知是什么？要得到正確的革蘭氏染色結果必需留意要得到正確的革蘭氏染色結果必需留意哪些操作？關鍵在哪幾步？為什么？哪些操作？關鍵在哪幾步？為什么？實實 驗驗 二二結結 束束
實驗二細菌的染色和細菌細胞構造的觀察ppt課件
